Questa procedura si basa su un metodo enzimatico migliorato, originariamente progettato per valutare la creatinina sierica e urinaria. Il test viene eseguito in due fasi. Nella prima fase, la creatina viene eliminata durante i primi minuti di pre-incubazione del campione con la creatinasi. Nella seconda fase, l'aggiunta di creatininasi dà inizio alla reazione, idrolizzando la creatinina nel campione in presenza di sarcosina ossidasi (Sar OD) con la produzione di perossido di idrogeno:_x000D_
Creatinina + H2O → Creatina_x000D_
Sarcosina + H2O + O2 → H2O2 + Glicina + HCHO_x000D_
Il perossido di idrogeno derivato dalla reazione dell'ossidasi viene quantificato mediante una reazione di tipo Trinder in cui il derivato cromogenico HTIB e la 4-amminoantipirina (4-AA) si condensano in presenza di perossidasi (POD) per formare un colorante rosso chinonimina._x000D_
4-AA + HTIB → chinonimina + H2O_x000D_
La velocità di sviluppo del colore è proporzionale alla concentrazione di creatinina nel campione.
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