L'acido solfanilico diazotato trasforma la bilirubina in azobilirubina colorata, che viene determinata fotometricamente. Delle due frazioni di bilirubina presenti nel siero, la bilirubina glucuronata e la bilirubina libera associata all'albumina, solo la prima reagisce direttamente, mentre la bilirubina libera deve essere dissociata dalla proteina da un acceleratore per reagire. La bilirubina indiretta è calcolata dalla differenza tra la bilirubina totale (con acceleratore) e la bilirubina diretta (senza acceleratore). I concetti di "diretta" e "indiretta" si riferiscono esclusivamente alle caratteristiche della reazione in presenza o in assenza di acceleratori o solubilizzatori e sono solo equivalenti approssimativi alle due frazioni di bilirubina citate.
La bilirubina diretta (coniugata) reagisce con il sale di diazonio 2,4-diclorofenildiazonio (2,4-DPD) in presenza di acido solfammico, formando azobilirubina. Questo complesso colorato può essere misurato fotometricamente a 546 nm. Delle due frazioni di bilirubina presenti nel siero, la bilirubina glucuronata (coniugata) e la bilirubina libera associata all'albumina (non coniugata), solo la prima reagisce direttamente, mentre la bilirubina libera deve essere dissociata dalle proteine da un acceleratore per reagire. La bilirubina indiretta è calcolata dalla differenza tra la bilirubina totale (con acceleratore) e la bilirubina diretta (senza acceleratore). I concetti di "diretta" e "indiretta" si riferiscono esclusivamente alle caratteristiche della reazione in presenza o in assenza di acceleratori o solubilizzatori e sono solo equivalenti approssimativi alle due frazioni di bilirubina citate.
---