"MOLgen Genetics Interleukin 28B Kit" è un kit di analisi per la determinazione dei polimorfismi a singolo nucleotide del gene dell'interleuchina 28B mediante reazione a catena della polimerasi in tempo reale con rilevamento delle curve di fusione.
Introduzione
"MOLgen Genetics Interleukin 28B Kit" è stato progettato per la determinazione dei polimorfismi a singolo nucleotide del gene dell'interleuchina 28B mediante reazione a catena della polimerasi in tempo reale con rilevamento delle curve di fusione. Il kit è destinato alla determinazione differenziale dei polimorfismi a singolo nucleotide rs12979860 C/T e rs8099917 T/G del gene dell'interleuchina 28B (IL28B) mediante reazione a catena della polimerasi (PCR) con fusione dei prodotti di ibridazione con un tag fluorescente e analisi delle curve di fusione.
L'estrazione del DNA da materiale clinico può essere eseguita utilizzando il kit: "MOLgen Universal Extraction Kit".
Il kit è destinato all'uso con il ciclatore per PCR in tempo reale CFX96 (Bio-Rad, USA).
Il kit è stato progettato per analizzare 48 campioni, compresi quelli di controllo.
Principio del metodo
Il principio del metodo si basa sull'amplificazione della regione di DNA umano selezionata, seguita dalla rilevazione delle curve di fusione dei complessi ibridi nei prodotti PCR e nelle sonde specifiche. Il processo di amplificazione consiste in cicli ripetuti: denaturazione termica della matrice di DNA, annealing di primer con sequenze complementari della matrice di DNA e sintesi di una catena complementare da questi primer con la Taq polimerasi.
Dopo la reazione di amplificazione, l'abbassamento della temperatura provoca l'ibridazione della sonda di DNA specifica con il prodotto di amplificazione e una diminuzione del segnale fluorescente nella provetta.
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