Il kit RT-PCR in tempo reale virellaSARS-CoV-2 mutante è un test per la differenziazione simultanea dei nuovi lineages di coronavirus (SARS-CoV-2) B.1.1.7 (Regno Unito, UK), B.1.351 (Sudafrica, ZA) e P.1 (Brasilia, BRA) da campioni biologici.
2 Principio del test
Il kit RT-PCR in tempo reale virellaSARS-CoV-2 mutanti contiene quattro sistemi di primer e sonde specifici per il rilevamento delle mutazioni della proteina spike della SARS-CoV-2. Ogni mutazione è correlata a una specifica proteina spike. Ogni mutazione è correlata a un colorante specifico. Se una delle mutazioni è presente, il canale specifico mostrerà un segnale assente o ritardato. Le mutazioni coperte da questo test sono del69/70 (FAM), del 241-243 (ROX), N501Y (HEX) e H655Y (Cy5). In caso di B.1.1.7 (UK), B.1.351 (ZA) o P.1 (BRA), il canale HEX e un canale aggiuntivo, a seconda della mutazione, mostreranno un segnale assente o ritardato (Tabella 7). In questo caso, gli altri due canali dovrebbero mostrare un segnale normale.
4 Apparecchiature e reagenti da fornire all'utente
- Microprovette sterili
- Pipette (volume regolabile)
- Puntali sterili con filtro
- Centrifuga da tavolo
- Vortexer
- Strumento per PCR in tempo reale
- Provette di reazione PCR ottiche con coperchio o piastra di reazione PCR ottica con foglio ottico
- Opzionale: Sistema di manipolazione dei liquidi per l'automazione
7 Materiale del campione
Il materiale di partenza per il kit virellaSARS-CoV-2 mutante RT-PCR in tempo reale è RNA qualificato come SARS-CoV-2 positivo mediante RT-PCR in tempo reale. Gli eluati con un numero di copie molto basso, con valori di CT >32, non sono adatti per l'analisi con la RT-PCR in tempo reale di virellaSARS-CoV-2 mutante.
8 Preparazione del campione
L'RNA eluito deve essere diluito 1:10 in tampone di diluizione per ottimizzare la condizione per la rilevazione delle mutazioni.
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