Questo kit si basa sul metodo Ziehl-Neelsen raccomandato dall'OMS ed è una colorazione chimica destinata all'individuazione di batteri acidofili come il Mycobacterium tuberculosis.
Principio:
I batteri acidofili come il Mycobacterium tuberculosis e il Mycobacterium leprae sono difficili da colorare a causa della loro capsula lipoide nella parete cellulare. Tuttavia, una volta che la capsula lipoide viene colorata con un colorante potenziato come la carbolfuchsina, il composto di nuova formazione resisterà alla decolorazione da parte dell'acido-alcool e manterrà il colore originale della colorazione (rosso), che può essere facilmente differenziato da altri microrganismi che ancora adsorbono il colorante blu del contatore. Il fenolo è un mordente in grado di migliorare la capacità di colorazione.
Metodi:
1. Deparaffinare il tessuto, aggiungere Carbolfuchsin, riscaldare con una piccola fiamma e mantenere la macchia fumante per 5~10 minuti. Evitare la vaporizzazione a secco o l'ebollizione.
2. Dopo il raffreddamento, sciacquare delicatamente con acqua. Tamponare delicatamente il vetrino con carta bibula.
3. Decolorare per 1~2 minuti con alcool acido.
4. Risciacquare delicatamente con acqua (se il rosso è ancora visibile sulla superficie del campione, aggiungere nuovamente alcol acido fino a quando il rosso è completamente decolorato. Quindi continuare a risciacquare con acqua).
5. Applicare il blu di metilene per 20-30 secondi. Risciacquare delicatamente con acqua.
6. Differenziare in etanolo al 95% per 5~10 secondi.
7. Disidratare in etanolo assoluto e schiarire con xilene. Montare con mezzi di montaggio.
8. In alternativa, la fase di disidratazione sopra descritta può essere sostituita dall'essiccazione all'aria.
9. Esaminare il vetrino finito sotto una lente a immersione in olio.
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