Il kit per la rivelazione dell'IFN-β umano HTRF è un immunodosaggio progettato per la rivelazione e la quantificazione dell'IFN-β umano nei surnatanti cellulari, in un formato omogeneo (senza fasi di lavaggio, senza fasi di separazione).
Panoramica
Gli interferoni di tipo I, interferone alfa (IFN-α) e interferone beta (IFN-β), svolgono un ruolo essenziale nella risposta immunitaria innata alle infezioni virali. L'espressione del gene IFN-β è controllata da fattori di trascrizione come IRF-3, c-Jun/ATF-2 e NF-kappaB a valle dei recettori di riconoscimento, come i recettori Toll-like. In particolare, l'IFN-β è il principale indicatore funzionale dell'attivazione della via cGas-cGAMP-STING. Una volta secreto, l'IFN-β si lega e attiva il complesso recettoriale IFNAR1/IFNAR2, che si appoggia ai fattori di trascrizione STAT1/2. La fosforilazione di STAT1/2 porta all'induzione dell'espressione genica antivirale.
La valutazione dei campioni di siero richiede spesso una maggiore sensibilità. In alcuni casi, i test AlphaLISA possono avere una sensibilità sufficiente per consentire la rilevazione di bassi livelli di analiti nel siero o nel plasma.
Principio del test
Il surnatante cellulare, il campione o lo standard vengono dispensati direttamente nella piastra del saggio per la rilevazione mediante i reagenti HTRF® (piastra bianca a basso volume da 384 pozzetti o piastra a basso volume da 96 pozzetti Revvity in 20 µL). Gli anticorpi marcati con il donatore e l'accettore HTRF sono premiscelati e aggiunti in un'unica fase di dispensazione, per semplificare ulteriormente la procedura di analisi. Il test può essere eseguito fino a un formato di 1536 pozzetti, semplicemente ridimensionando ogni volume di aggiunta in proporzione.
Analisi dei dati del saggio
La curva logistica a 4 parametri (4PL) è comunemente raccomandata per l'adattamento di una curva standard ELISA.
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