Reagente soluzione colorante TB (Ziehl-Neelsen)

colorantemicrobiologicoper microscopia

Uso previsto: Per l'identificazione dei batteri acido-resistenti del genere Mycobacterium, che include il Mycobacterium tuberculosis che causa la tubercolosi. Principio: Questo kit di colorazione si basa sulla colorazione di Ziehl-Neelsen (una soluzione di carbolfucsina) raccomandata dall'OMS. I batteri acido-resistenti come Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium leprae sono difficili da colorare a causa della loro capsula lipoide nella parete cellulare. Tuttavia, una volta che la capsula lipoide è colorata con un colorante potenziato come la carbolfucsina, il composto appena formato resisterà alla decolorazione da acido-alcool e manterrà il colore originale colorato (rosso), che può essere facilmente differenziato da altri microrganismi che assorbono ancora la contro-colorazione blu. Metodi: 1. Fissare lo striscio con la fiamma e quindi aggiungere la carbolfucsina. Riscaldare lentamente e mantenere la colorazione a vapore per 5 minuti. Evitare di vaporizzare fino a seccare o bollire. 2. Attendere alcuni minuti per raffreddare, risciacquare delicatamente con acqua (Tamponare delicatamente il vetrino con carta bibula) 3. Decolorare per 2 minuti con acido-alcool. 4. Risciacquare delicatamente con acqua (se il colore rosso è ancora visibile sulla superficie del campione, aggiungere nuovamente acido-alcool fino a quando il rosso è completamente decolorato). 5. Applicare blu di metilene per 30 secondi. Risciacquare delicatamente con acqua e asciugare all'aria. Esaminare il vetrino finito al microscopio. Specifiche: Contenuto: 3 fiale da 100 ml/kit, 3 bottiglie da 250 ml/kit, 3x(6 bottiglie da 500 ml)/kit Componenti: - Carbolfucsina: 1x100ml, 1x250ml, 6x500ml (Carbolfucsina, Fenolo) - Acido-alcool: 1x100ml, 1x250ml, 6x500ml (Etanolo, Acido cloridrico) - Blu di metilene: 1x100ml, 1x250ml, 6x500ml (Blu di metilene) Precauzione: 1. Dopo ogni utilizzo, tappare immediatamente il flacone del reagente per evitare la vaporizzazione. 2. Per i campioni di espettorato, lo striscio deve essere adeguatamente ispessito per aumentare il tasso di rilevamento. Per uno striscio più spesso, il tempo di contro-colorazione deve essere controllato. L'esame microscopico sarà influenzato se lo sfondo è troppo scuro. 3. Occasionalmente, l'intensità della colorazione rossa può essere diversa per lo stesso batterio acido-resistente. Notare la differenza nell'intensità della colorazione rossa durante l'osservazione. 4. Per la conservazione del kit, evitare l'esposizione a temperature estremamente alte o basse e alla luce solare. 5. Quando si colorano vetrini patologici acido-resistenti, è consigliato il metodo di riscaldamento. Per risultati migliori, il tempo di colorazione della carbolfucsina dovrebbe essere superiore a 5 minuti. Risultati attesi: Le specie di Mycobacterium acido-resistenti appariranno di un rosso brillante, mentre altri batteri e cellule saranno blu. Mycobacterium tuberculosis è un batterio a forma di bastoncello (bastoncello dritto o curvo) Gram-positivo, lungo circa 1,3 a 3,5 µm e largo 0,3 a 0,5 µm. Non forma flagelli né spore. Mycobacterium può essere facilmente colorato con colorazione acido-resistente. Al microscopio, i batteri acido-resistenti possono apparire come bastoncelli in gruppo, o come particelle durante la metamorfosi. A livello cellulare inferiore, alcune forme speciali, come "V", "Y" e "T", possono essere formate tramite il collegamento di 2-3 cellule. - Destinato all'identificazione di Mycobacterium acido-resistenti (ad esempio, M. tuberculosis) - Metodo di Ziehl-Neelsen (carbolfucsina), raccomandato dall'OMS - Contenuto del kit: Carbolfucsina, Acido-alcool, Blu di metilene (volumi vari) - Precauzioni: Tappare le bottiglie dopo l'uso, controllare il tempo di contro-colorazione, evitare temperature estreme, metodo di riscaldamento raccomandato - Risultato atteso: I batteri acido-resistenti si colorano di rosso, gli altri di blu