Kit di reagenti in soluzione CellAmp™ Whole

da ricercaper PCRper acidi nucleici

Il kit di amplificazione dell'intero trascrittoma CellAmp (Real Time), versione 2, consente di passare dalle cellule al cDNA pronto per l'analisi mediante PCR in tempo reale. Quando si utilizzano tecniche convenzionali per lavorare con tracce di acidi nucleici, la perdita di prodotto durante le fasi di purificazione è un problema frequente. Tuttavia, questo kit da cellule a cDNA garantisce una buona resa del prodotto perché non sono necessarie fasi di purificazione dell'RNA e del cDNA che comportano perdite. La procedura inizia con la lisi cellulare, seguita da una reazione di trascrizione inversa con il primer adattatore dT (RT dT Primer 2) per sintetizzare il cDNA dall'mRNA. Successivamente, la deossinucleotidil transferasi terminale (TdT) viene utilizzata per aggiungere una coda dA al cDNA sintetizzato. Il prodotto cDNA contenente una coda dA in 3' viene utilizzato come templato diretto per la PCR, riducendo così i cicli di amplificazione necessari. Oltre a passare dalle cellule al cDNA, questo prodotto può essere usato per amplificare il cDNA da tracce di RNA. Il kit di amplificazione dell'intero trascrittoma CellAmp (Real Time), versione 2, utilizza una fase aggiuntiva di trattamento con esonucleasi I, che aiuta a sopprimere l'amplificazione non specifica derivata dal primer e aumenta la resa dei geni poco espressi Il kit di amplificazione dell'intero trascrittoma CellAmp (Real Time) Ver. 2 consente l'amplificazione diretta del cDNA da un piccolo numero di cellule. Il cDNA amplificato può essere utilizzato come templato per la PCR in tempo reale. Quando si utilizzano tecniche convenzionali per lavorare con tracce di acidi nucleici, la perdita di acido nucleico durante le fasi di purificazione è un problema frequente. Tuttavia, questo kit offre una buona resa perché non sono necessarie fasi di purificazione dell'RNA e del cDNA che comportano perdite.