Kit di reagenti soluzione tampone SMART-Seq® HT

per acidi nucleiciper sequenziamento di DNAper sintesi di ADN complementare

Il kit SMART-Seq HT (SS-HT) e il kit SMART-Seq HT PLUS (SS-HT PLUS) sono kit facili da automatizzare che utilizzano il priming con oligo(dT) per generare cDNA di alta qualità a lunghezza completa direttamente da 1-100 cellule o 10 pg-1 ng di RNA totale. Oltre al kit di sintesi del cDNA di base, il kit SS-HT PLUS comprende anche un kit di preparazione della libreria e piastre monouso a doppio indice (UDI) per generare librerie di sequenziamento compatibili con Illumina. Il kit di sintesi cDNA SS-HT ha un protocollo semplificato ottimizzato per lavorare a valle del FACS e riduce il tempo di lavoro rispetto ai kit SMART-Seq v4, grazie all'introduzione di una comoda fase combinata di trascrizione inversa e amplificazione PCR. La tecnologia SMART (Switching Mechanism at 5' End of RNA Template) che alimenta la sintesi del cDNA fornisce una copertura completa del trascritto, rendendola uno strumento potente per lo studio dell'espressione genica in singole cellule, comprese le giunzioni di splice e lo splicing alternativo. Il priming con oligo(dT) viene utilizzato per amplificare specificamente l'mRNA da RNA totale di alta qualità (RIN >8) o da cellule intatte. La tecnologia LNA migliora l'efficienza della commutazione del templato, aumentando il numero di geni identificati rispetto ad altri metodi. Il kit SS-HT PLUS incorpora la nostra chimica brevettata per la preparazione delle librerie, che utilizza la frammentazione enzimatica e gli adattatori stem-loop per costruire librerie di alta qualità, compatibili con Illumina, a partire dal cDNA sintetizzato con il kit principale. Questo flusso di lavoro in due fasi si svolge in un'unica provetta e può essere completato in circa due ore; non sono necessarie fasi intermedie di purificazione.