Kit di reagenti in soluzione NZYGigaprep

soluzione tamponeper trascrizione in vitrodell'Escherichia coli

Il kit NZYGigaprep consente la preparazione rapida di DNA plasmidico altamente puro su larga scala da ceppi di E. coli. Dettagli Il kit NZYGigaprep è stato progettato per la preparazione rapida e su larga scala di DNA plasmidico altamente puro. Il kit è stato ottimizzato per ottenere tipicamente 2-10 milligrammi di DNA da plasmidi ad alto numero di copie o da 500 microgrammi a 2 milligrammi di acido nucleico da plasmidi a basso numero di copie, tutti provenienti da ceppi di Escherichia coli ricombinanti. Il nostro kit semplifica il processo con una procedura di lisi alcalina/SDS modificata. Questa procedura prepara il pellet di cellule batteriche per la purificazione dei plasmidi. Essa prevede la denaturazione del DNA cromosomico e plasmidico in condizioni alcaline. Successivamente, l'introduzione di acetato di potassio avvia la formazione di un precipitato che contiene DNA cromosomico e altri componenti cellulari. Contemporaneamente, il tampone acetato di potassio neutralizza il lisato, consentendo al DNA plasmidico di tornare al suo stato superavvolto nativo, mantenendolo in soluzione. Dopo aver equilibrato la colonna con il tampone di equilibrazione, il DNA plasmidico si lega selettivamente alla resina a scambio anionico. Con un lavaggio accurato della colonna, il DNA plasmidico è efficacemente purificato e pronto per l'eluizione. Una semplice fase di precipitazione consente di raccogliere il DNA eluito, che può essere prontamente disciolto in tampone TE per l'uso successivo. Il DNA purificato è adatto alle applicazioni di biologia molecolare più complesse, tra cui la trasfezione, la trascrizione in vitro, il sequenziamento automatico a fluorescenza o manuale, il clonaggio, la PCR e l'ibridazione. Per isolare il DNA da plasmidi, BAC o cosmidi a basso numero di copie, raddoppiare i volumi dei tamponi M1, M2 e M3