La maggior parte dei metodi attualmente usati per la determinazione quantitativa di bilirubina sono basati sulla reazione fra bilirubina ed acido solfanilico diazotato. Nella soluzione acquosa soltanto la bilirubina diretta della bilirubina (coniugata) reagirà in questo modo. D'altra parte, per stimare la bilirubina totale la bilirubina unconjugated deve essere liberata dal collegamento all'albumina ed ha reso solubile in acqua. Nel metodo di Malloy-Evelyn il metanolo è usato mentre il benzoato sodio/della caffeina è utilizzato nel metodo di Jendrassik-Grof.
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