Spiana la strada all'analisi funzionale di una specifica domanda di ricerca.
Uso previsto
Questo kit FluoroSpot Path è destinato al conteggio delle cellule B che secernono IgG umane in risposta al SARS-CoV-2 (Spike e RBD) utilizzando il test FluoroSpot. Possono essere enumerate anche le cellule B che secernono IgG indipendentemente dalla specificità dell'antigene (IgG totali). Solo per uso di ricerca. Non per l'uso in procedure diagnostiche.
Per le cellule B della memoria, si consiglia la pre-stimolazione con R848 e IL-2 umana ricombinante (entrambi inclusi).
Prestazioni
I PBMC umani di un individuo convalescente COVID-19 sono stati incubati con R848+IL-2 (stimola le cellule B della memoria) in provetta per tre giorni. Le cellule sono state quindi ampiamente lavate e aggiunte a una piastra FluoroSpot (250.000 cellule/pozzetto) rivestita con mAbs IgG antiumani. Gli spot IgG specifici di Spike sono stati rilevati con Spike-GAL, cioè la proteina Spike ricombinante con un tag peptidico GAL, seguita da anti-GAL-490. Le macchie specifiche di RBD sono state rilevate con RBD-WASP, cioè la proteina Receptor Binding Domain ricombinante con un tag peptidico WASP, seguita da anti-WASP-640. Gli spot sono stati analizzati con Mabtech IRIS.
Descrizione dell'analita -
L'immunoglobulina G (IgG) è l'isotipo di Ig più abbondante nel siero e costituisce circa l'80% di tutte le immunoglobuline del siero. Nell'uomo esistono quattro sottoclassi di immunoglobuline G, con le più alte concentrazioni sieriche di IgG1 seguite da IgG2, IgG3 e IgG4. Nei topi, le sottoclassi di IgG sono definite come IgG1, IgG2a/c, IgG2b e IgG3. La molecola di IgG è costituita da due catene pesanti e due leggere (κ o λ), con il risultato di una molecola con due bracci per il legame con l'antigene.
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