L'anticorpo CA15-3 marcato con FITC e la coppia di anticorpi CA15-3 marcati con AP si legano all'antigene CA15-3 del campione, del controllo o del calibratore e formano un complesso a sandwich. Quindi si aggiungono le microsfere magnetiche che si legano all'Anti-FITC; grazie al legame specifico tra FITC e Anti-FITC, il complesso viene legato dalle microsfere magnetiche. L'intero complesso sarà quindi catturato dal campo magnetico esterno applicato e separato dalla sostanza non legata. Dopo il lavaggio, aggiungere il substrato. Il substrato sarà catalizzato sotto l'azione dell'enzima e formerà un intermedio instabile allo stato eccitato. Quando l'intermedio allo stato eccitato torna allo stato fondamentale, emette fotoni e produce una reazione di emissione di luce. Quindi l'analizzatore CLIA misurerà l'intensità luminosa e conterà i risultati attraverso un software confrontando l'intensità luminosa con il valore di cutoff per determinare se esiste l'anticorpo corrispondente.
Preparazione per l'analisi
- I campioni dei pazienti che hanno un aspetto torbido o nuvoloso devono essere centrifugati prima di essere analizzati. Dopo la centrifugazione, evitare lo strato lipidico (se presente) quando si pipetta il campione in un bicchiere per campioni o in una provetta secondaria.
- I campioni devono essere mescolati accuratamente dopo lo scongelamento, agitando con un vortex a bassa velocità o capovolgendo delicatamente, e centrifugati prima dell'uso per rimuovere i globuli rossi o il particolato, per garantire la coerenza dei risultati. Si devono evitare cicli multipli di congelamento/scongelamento dei campioni.
- Tutti i campioni (campioni dei pazienti, controlli e calibratori) devono essere analizzati entro 3 ore dall'inserimento nel sistema CIA. Consultare il servizio ZECEN,
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