La proteinasi K è una proteasi endolitica che scinde i legami peptidici sui lati carbossilici degli amminoacidi alifatici, aromatici o idrofobici.La proteinasi K è classificata come serina proteasi.Il peptide più piccolo ad essere idrolizzato da questo enzima è un tetrapeptide.
Caratteristiche
• Proteinasi K ricombinante
• Attivo in un'ampia gamma di prodotti di reazione
Applicazioni
• Isolamento del DNA genomico da cellule e tessuti in coltura
• Rimozione di DNasi e RNasi durante l'isolamento di DNA e RNA da tessuti o linee cellulari
• Determinazione della localizzazione enzimatica
• Miglioramento dell'efficienza di clonazione dei prodotti PCR
Controllo di qualità
Attività della DNAsi:Nessuna attività enzimatica rilevabile dopo 6 ore di incubazione con λ DNA a 37ºC.
Attività RNasi:Nessuna attività ribonucleasica rilevabile dopo 16 ore di incubazione con RNA a 25ºC.
Fonte
Da cellule di lievito con gene clonato che codifica per l'album Engyodontium geneticamente modificato (Album di tritirachi) proteasi endolitica.
Peso molecolare
Monomero da 29,3 kDa.
Definizione di Unità di Attività
Un'unità dell'enzima libera amminoacidi Folin-positivi e peptidi corrispondenti a 1 µmol di tirosina in 1 min a 37°C, pH 7,5 usando emoglobina denaturata come substrato.
L'attività enzimatica viene misurata nella seguente miscela: fosfato di potassio 0,08 M (pH 7,5), urea 5 M, NaCl 4 mM, CaCl 3 mM2e 16,7 mg/ml di emoglobina.
Istruzioni per la preparazione
La soluzione madre può essere preparata come 40-80 mg/ml in tampone di diluizione [20 mM Tris-HCl (pH 7,4), 1 mM CaCl2] o [20 mM Tris-HCl (pH 7,4),