Reagente anticorpo TurboGFP-Trap

per imaging cellularedi biochimicadi proteine

Le proteine di fusione fluorescenti sono strumenti popolari per studiare la localizzazione delle proteine e la dinamica cellulare. Questi costrutti di solito fondono l'intera proteina bersaglio, o almeno un suo dominio funzionale, con uno dei numerosi tipi di proteine fluorescenti reporter. La proteina verde fluorescente dimerica TurboGFP deriva dalla proteina verde fluorescente CopGFP del copepode Pontellina plumata (Shagin et al., 2004). Possiede una fluorescenza verde brillante con massimo di eccitazione a 482 nm e massimo di emissione a 502 nm. TurboGFP è una proteina a maturazione rapida: il suo segnale fluorescente all'interno di una cellula è visibile prima di altre proteine verdi fluorescenti. La TurboGFP condivide solo il 20% circa di identità di sequenza con le varianti della GFP delle meduse. Pertanto, la maggior parte degli anticorpi anti-GFP non si lega alla TurboGFP, compreso il nostro GFP-Nanobody utilizzato in GFP-Trap. È facile immaginare le cellule utilizzando un costrutto di proteina di fusione TurboGFP, anche se per ottenere un quadro completo i dati di imaging sono spesso combinati con informazioni biochimiche aggiuntive per la proteina (o il dominio proteico) di interesse. Per questi esperimenti biochimici, di solito viene progettata una seconda proteina di fusione che utilizza un dominio "tag" diverso che consente la purificazione. Queste analisi aggiuntive in vitro possono essere utilizzate per confermare la funzionalità del costrutto di fusione "taggato" e per individuare i complessi multiproteici che possono formarsi nell'ambiente cellulare. La mancanza di reagenti specifici, affidabili ed efficienti ha limitato l'uso della GFP e delle relative proteine di fusione fluorescenti, sia per gli studi di biologia cellulare che per le analisi biochimiche dirette.