Il kit ABScript II per la sintesi del cDNA First Strand comprende due miscele ottimizzate, ABScript II Enzyme Mix e ABScript II Reaction Mix. La miscela enzimatica combina la trascrittasi inversa ABScript II e l'inibitore di RNasi, mentre la miscela di reazione contiene un tampone ottimizzato. ABScript II Reverse Transcriptase è una trascrittasi inversa ricombinante M-MuLV con ridotta attività RNase H e maggiore termostabilità. Può essere utilizzata per sintetizzare il primo filamento di cDNA a temperature più elevate rispetto alla M-MuLV wild type. L'enzima è attivo fino a 48°C, il che garantisce una maggiore specificità e una maggiore resa di cDNA.
Il kit fornisce anche due primer ottimizzati per la trascrizione inversa e acqua priva di nucleasi. Un primer Oligo-dT ancorato [d(T)23VN] costringe il primer ad annealizzarsi all'inizio della coda di polyA. La miscela ottimizzata di primer casuali fornisce siti di priming casuali e coerenti che coprono l'intero modello di RNA, compresi gli mRNA e gli RNA non poliadenilati. Il prodotto cDNA a primo filamento generato può raggiungere i 10 kb.
Caratteristiche del prodotto
La bassa attività della RNasi H favorisce la sintesi di cDNA a frammenti lunghi, che possono sintetizzare cDNA fino a 10 KB.
La temperatura ottimale dell'enzima è stata di 42℃ e l'enzima ha ancora un'attività elevata a 48℃.
La resa specifica di cDNA è stata superiore a quella della normale trascrittasi inversa M-MLV (37℃).
Adatto per il rilevamento dei coronavirus;
Con una varietà di primer RT, sia l'mRNA che l'ncRNA possono essere utilizzati come modelli di trascrizione inversa.
---