Reagente enzima GspSSD

DNA polimerasiper amplificazione isotermicakit LAMP

La mastermix originale di OptiGene per l'amplificazione isotermica: basta aggiungere il templato e i primer. Contiene la nuova polimerasi GspSSD LF di OptiGene. Velocità di amplificazione superiore. Adatta all'amplificazione isotermica rapida del DNA. L'attività di trascrittasi inversa nativa consente la RT-LAMP a singolo enzima. Un DNA target (VKORC1) è stato amplificato da gDNA umano (Sigma). le reazioni LAMP da 25μl sono state eseguite a 65ºC per 60 minuti su un termociclatore in tempo reale (Roche LC-480) in duplicato. Il "Tempo al risultato" è definito come il tempo in cui il valore di fluorescenza dell'amplificazione raggiunge una soglia del 10% della fluorescenza massima. Le Master Mix isotermiche di OptiGene (ISO-001 e ISO-004) sono state confrontate con il kit WarmStart LAMP (DNA e RNA) di NEB [Lot:0021609]. ISO-001 e ISO-004 NON contengono un enzima specifico per la trascrittasi inversa (RT). Per un confronto veritiero con la miscela NEB (che contiene un enzima di trascrittasi inversa separato e specifico) sono state aggiunte 0,5U AMV-RT alle reazioni OptiGene Master Mix (ISO-001 inc. RT e ISO-004 inc. RT). Sono state confrontate anche le reazioni RT-LAMP standard ISO-001 e ISO-004 per dimostrare l'eccellente attività intrinseca della trascrittasi inversa della miscela. Un RNA target (Beta-actina) è stato amplificato da RNA totale umano (Ambion). le reazioni RT-LAMP da 25μl sono state eseguite a 65ºC per 60 minuti su un termociclatore in tempo reale (Roche LC-480) in duplicato. Il "Tempo al risultato" è definito come il tempo in cui il valore di fluorescenza dell'amplificazione raggiunge una soglia del 10% della fluorescenza massima.