Reagente enzima GspSSD2.0

per amplificazione isotermicakit LAMP

Il mastermix LAMP e RT-LAMP più veloce al mondo. La mastermix progettata da OptiGene per l'amplificazione isotermica più veloce di DNA e RNA. Contiene la nostra nuova GspSSD LF DNA Polimerasi, ulteriormente ingegnerizzata attraverso la progettazione in-silico. L'attività di trascrittasi inversa nativa consente una rapida RT-LAMP a singolo enzima. Il DNA target (VKORC1) è stato amplificato da gDNA umano (Sigma). le reazioni LAMP da 25μl sono state eseguite a 65ºC per 60 minuti su un termociclatore in tempo reale (Roche LC-480) in duplicato. Il "Tempo al risultato" è definito come il tempo in cui il valore di fluorescenza dell'amplificazione raggiunge una soglia del 10% della fluorescenza massima. Le Master Mix isotermiche di OptiGene (ISO-001 e ISO-004) sono state confrontate con il kit WarmStart LAMP (DNA e RNA) di NEB [Lot:0021609]. ISO-001 e ISO-004 NON contengono un enzima specifico per la trascrittasi inversa (RT). Per un confronto reale con la miscela NEB (che contiene un enzima reverse-transcriptase separato e specifico) sono state aggiunte 0,5U AMV-RT alle reazioni OptiGene Master Mix (ISO-001 inc. RT e ISO-004 inc. RT). Sono state confrontate anche le reazioni RT-LAMP standard ISO-001 e ISO-004 per dimostrare l'eccellente attività intrinseca della trascrittasi inversa della miscela. Un RNA target (Beta-actina) è stato amplificato da RNA totale umano (Ambion). le reazioni RT-LAMP da 25μl sono state eseguite a 65ºC per 60 minuti su un termociclatore in tempo reale (Roche LC-480) in duplicato. Il "Tempo al risultato" è definito come il tempo in cui il valore di fluorescenza dell'amplificazione raggiunge una soglia del 10% della fluorescenza massima.