Il Ni Focurose FF (TED) è un metodo di purificazione che utilizza l'interazione tra Ni2+ e alcuni amminoacidi (principalmente istidina, cisteina e triptofano) sulle catene laterali delle proteine per la separazione e la purificazione. È adatto per la purificazione di proteine His-tagged e altre biomolecole che interagiscono con il Ni2+. La forte proprietà chelante del Ni2+ consente l'applicazione diretta nella purificazione di proteine His-tagged espresse in sistemi di secrezione eucariotici, tollerando livelli più elevati di agenti riducenti e chelanti senza la necessità di pretrattare il campione. La resina può essere facilmente pulita e rigenerata senza stripping del nichel, consentendo la pulizia diretta con NaOH.
Caratteristiche
Rapida e semplice (purificazione in un'unica fase)
Tollera livelli più elevati di agenti riducenti e chelanti, consentendo l'applicazione diretta di proteine His-tagged espresse in sistemi di secrezione eucariotici senza pretrattamento, massimizzando la conservazione dell'attività proteica.
Non richiede lo stripping del nichel, consentendo la pulizia diretta con NaOH e abbreviando notevolmente il ciclo di pulizia.
Lisciviazione del nichel inferiore rispetto ai tradizionali Ni Focurose FF (IDA) e Ni FocuroseFF (IMAC), eliminando la necessità di rigenerazione ripetuta.
Parametri di prestazione
Agarosio al 6% altamente reticolato
Gamma di dimensioni delle particelle
45-165µm
Dimensione media delle particelle (D50)
90±5µm
Capacità legante
≥10 mg (proteina His-tagged)/mL (resina)
stabilità al pH
3-12 (a lungo termine) 2-14 (a breve termine)
Stabilità chimica
0.01M HCl, 0,01M NaOH (una settimana)
20mM EDTA, 10mM DTT, 1M NaOH, 8M urea, 6M HCl guanidina (24 ore)
100mM EDTA, 0,5M imidazolo (2 ore) 30% isopropanolo (20 minuti)
Velocità di flusso lineare (0,3 MPa)
≥300 cm/h
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