Reagente in soluzione NI™

albumina di siero bovinoda laboratoriodi proteine

Protocols.io fornisce una versione interattiva di questo protocollo dove è possibile scoprire e condividere le ottimizzazioni con la comunità dei ricercatori. Un saggio proteico colorimetrico altamente sensibile che supera l'interferenza dei comuni agenti di laboratorio presenti nelle soluzioni proteiche e mostra una variazione minima da proteina a proteina. Il saggio non è influenzato dalla presenza di agenti di laboratorio comuni, come agenti riducenti, agenti chelanti, detergenti, ammine, zuccheri, caotropi, sali, farmaci, antibiotici, cobalto e altri agenti di laboratorio comuni (vedi tabelle 1 e 2). Il NI™ Protein Assay è composto da due semplici fasi: L'agente precipitante universale per le proteine (UPPA™) viene aggiunto alle soluzioni proteiche per precipitare rapidamente le proteine totali. Le proteine vengono immobilizzate per centrifugazione e gli agenti interferenti presenti nel surnatante vengono scartati. La concentrazione della proteina viene dosata mescolandola con una soluzione alcalina contenente una concentrazione nota di sale di rame; gli ioni di rame si legano alla spina dorsale peptidica e il saggio misura gli ioni di rame non legati (vedi figura 2). Il test è indipendente dalle catene laterali della proteina, riducendo al minimo la variazione da proteina a proteina (vedi figura 3). La densità del colore è inversamente proporzionale alla quantità di proteine. Il test viene fornito con uno standard proteico tradizionale di sieroalbumina bovina (BSA) o con uno standard proteico non animale. Caratteristiche Risposta lineare 0,5µg-50µg di proteine Piccoli requisiti di campione, solo 1-50µl Insensibile a sostanze chimiche e agenti non proteici Tempo del protocollo: ~30 minuti Lunga durata di conservazione Applicazioni Stima delle proteine durante la purificazione delle proteine, l'elettroforesi, la biologia cellulare, la biologia molecolare e altre applicazioni di ricerca.