Kit di test per malattie gastrointestinali EG-90068-NGS

di oncologiageneticodi sangue

I kit EliGene® NGS consentono l'amplificazione PCR multipla di tutte le regioni target richieste del gene o dei geni di interesse. La quantità di DNA consigliata per ogni reazione di PCR multipla è compresa tra 20 e 100 ng di DNA derivato da materiale FFPE (formalin-fixed paraffin-embedded) o da sangue. Successivamente, gli ampliconi risultanti vengono codificati con sequenze MID e mescolati per ogni campione. Il campione viene quantificato e sequenziato con uno strumento NGS Illumina per il sequenziamento massivo parallelo (MPS) secondo le istruzioni del produttore. Le letture di sequenza risultanti vengono successivamente analizzate per confronto con la sequenza di riferimento del gene o dei geni target per identificare le posizioni delle varianti. Introduzione I kit EliGene® NGS sono utilizzati per una o più reazioni di PCR multiplex che portano all'amplificazione di regioni target di un campione. Per l'amplificazione viene utilizzata una mastermix pronta all'uso contenente una DNA polimerasi hot-start. Gli ampliconi risultanti di ogni multiplex vengono diluiti 100 volte. Nella seconda fase, viene eseguito un secondo ciclo di PCR utilizzando il kit EliGene® Adaptor-IL NGS, che consente di etichettare tutti gli ampliconi per incorporare i MID e gli adattatori p7 e p5 necessari per il sequenziamento Illumina MiSeq. Gli ampliconi taggati risultanti vengono miscelati per individuo applicando uno schema di miscelazione predefinito specifico per il saggio. Ogni libreria di ampliconi viene successivamente purificata dai piccoli frammenti di DNA residui più corti di 150 bp e la concentrazione di DNA viene determinata mediante una PCR in tempo reale con standard di concentrazione.