Opal™ è un flusso di lavoro pratico per la rilevazione simultanea di un massimo di 6 biomarcatori tissutali più la colorazione nucleare, in una singola immagine. Il metodo è simile all'immunoistochimica standard ed è accessibile a molti laboratori che sviluppano metodi IHC standard. Le confezioni di reagenti Opal Fluorophore indipendenti consentono di scegliere la quantità e il design dei biomarcatori del pannello.
Il pacchetto di reagenti Opal 780 è una reazione in due parti e fa parte del flusso di lavoro Phenoptics 2.0 per vetrini interi a 7 colori. Il Reagent Pack contiene:
Opal TSA-DIG, 1 fiala
Opal Polaris 780, 1 fiala
Dimetilsolfossido (DMSO), 1 x 100 uL
Gli utenti devono procurarsi separatamente gli anticorpi primari e gli altri reagenti per il flusso di lavoro. La confezione contiene una quantità di reagenti sufficiente a colorare fino a 50 vetrini. In genere, per ogni vetrino sono necessari 100-300 µL di soluzione di lavoro Opal.
Protocollo per la ricostituzione e la diluizione di Opal TSA-DIG:
Sciogliere il Reagente Opal TSA-DIG in 75 uL di DMSO.
Prima di ogni procedura, diluire Opal TSA-DIG in 1X Plus Amplification Diluent per la colorazione manuale o 1X Plus Automation Amplification Diluent per l'automazione per ottenere la soluzione di lavoro Opal TSA-DIG. Il rapporto di diluizione consigliato è 1:100.
Protocollo per la ricostituzione e la diluizione di Opal 780:
Sciogliere il Reagente Opal 780 in 300 uL di ddH2O.
Prima di ogni procedura, diluire Opal 780 in Blocking/Ab Diluent per ottenere Opal 780 Working Solution. Il rapporto di diluizione consigliato è di 1:25.
Le confezioni di reagenti Opal possono essere utilizzate per la colorazione dei tessuti sia mono che multiplex e sono state configurate e convalidate per l'imaging sul sistema di imaging quantitativo per patologia PhenoImager HT (ex Vectra® Polaris™).
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