Questo metodo è modificato dalla colorazione Diff-Quick e Wright-Giemsa raccomandata dall'OMS. È destinato all'esame di colorazione della morfologia degli spermatozoi, della citologia spermatica e della citologia prostatica.
Principio:
Le proteine con punti isoelettrici diversi negli spermatozoi e nelle cellule hanno cariche diverse a parità di pH e quindi si legano selettivamente a coloranti diversi. Gli amidi liberati dalle proteine acidofile hanno cariche positive e si legano al colorante acido (eosina) diventando rossi. I carbossili liberati dalle proteine basofile hanno cariche negative e legano il colorante alcalino (blu di metilene) per colorarsi di blu. Le proteine neutrofile, le cui cariche positive derivanti dagli amidi liberati sono equivalenti alle cariche negative dei carbossili liberati, legano contemporaneamente sia il colorante acido che quello alcalino e appaiono color malva. Tuttavia, poiché le cariche liberate sono uguali, la colorazione è debole. Il tampone può prevenire l'interferenza delle sostanze acide e alcaline per ottenere un risultato soddisfacente.
Metodi:
Centrifugare gli spermatozoi liquefatti per 8 minuti (500 rpm) e rimuovere il surnatante. Lavare il precipitato con soluzione salina isotonica 2~3 volte per 5 minuti ciascuna (2.000 rpm). Per i campioni con molti spermatozoi, prelevare gli spermatozoi liquefatti dal fondo della provetta, lavarli e centrifugarli con soluzione salina isotonica per 2~3 volte.
Aggiungere soluzione salina isotonica per risospendere il precipitato centrifugato dopo il lavaggio. Spingere in fette secondo il metodo del film ematico di spinta. Asciugare all'aria o con ventilazione.
Coprire lo striscio con 1~2 gocce di colorante A per 15~20 secondi (il colorante può asciugarsi in questo momento).
Lavare il colorante A con tampone fosfato M/15, quindi gettare brevemente il tampone.
---