Questo kit ELISA utilizza il principio dell'ELISA competitiva. La piastra micro ELISA fornita in questo kit è stata pre-rivestita con Cort. Gli standard o i campioni vengono aggiunti ai pozzetti appropriati della piastra micro ELISA con un anticorpo coniugato con biotina specifico per Cort. Successivamente, l'Avidina coniugata alla perossidasi di rafano (HRP) viene aggiunta a ciascun pozzetto della micropiastra e incubata. Successivamente viene aggiunta la soluzione di substrato TMB. La reazione enzima-substrato viene terminata con l'aggiunta di una soluzione di acido solforico e il cambiamento di colore viene misurato spettrofotometricamente a una lunghezza d'onda di 450 nm ± 10 nm. La concentrazione di Cort nei campioni viene quindi determinata confrontando la DO dei campioni con la curva standard.
Dati tecnici
Poiché i valori di OD della curva standard possono variare a seconda delle condizioni di esecuzione del test (ad es. operatore, tecnica di pipettaggio, tecnica di lavaggio o effetti della temperatura), l'operatore deve stabilire una curva standard per ogni test. La curva standard e i dati tipici sono forniti di seguito a titolo di riferimento.
Precisione
Precisione intra-test (precisione all'interno di un test): 3 campioni con livello basso, medio e alto sono stati analizzati rispettivamente 20 volte su una piastra.
Precisione inter-saggio (precisione tra i saggi): 3 campioni con livello basso, medio e alto sono stati analizzati rispettivamente su 3 piastre diverse, 20 repliche in ciascuna piastra.
Tasso di recupero
È stato valutato il recupero di spiked a tre diversi livelli in campioni per tutto l'intervallo del saggio in varie matrici.
Lineare
I campioni sono stati dosati con alte concentrazioni di proteine target e diluiti con lo Standard di riferimento e il Diluente campione per produrre campioni con valori compresi nell'intervallo del test.
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