Kit di reagenti per amplificazione di DNA Ampli1 WGA PLUS

DNA polimerasiTaq polimerasiNGS

Il kit Ampli1 WGA PLUS è stato sviluppato e ottimizzato per un'amplificazione bilanciata e completa del contenuto totale di DNA di una singola cellula umana. Il DNA in ingresso (da una singola cellula e fino a 1000 cellule in ~1 μI di PBS) può derivare da cellule fresche/vive e/o fissate (provette PFA2%, CellSave, CellRescue). Il kit può essere utilizzato anche per amplificare fino a 10 ng di DNA genomico (ad esempio, da campioni di tessuto o FFPE). Dopo la lisi cellulare, il DNA viene digerito con un enzima di restrizione e gli adattatori vengono legati ai frammenti di DNA. In questo modo si garantisce che, per qualsiasi locus del genoma, gli alleli corrispondenti vengano amplificati come frammenti genomici con la stessa lunghezza e un contenuto di GC quasi identico, riducendo così drasticamente il drop-out allelico dovuto alla diversa efficienza di amplificazione delle molecole di DNA originali. L'amplificazione, eseguita nella stessa provetta, è mediata da un singolo primer PCR universale altamente specifico per tutti i frammenti e utilizza una DNA polimerasi con attività di correzione esonucleasica 3'→5', con una fedeltà 6,5 volte superiore rispetto alla DNA polimerasi Taq standard. Il risultato del protocollo Ampli1 WGA è una libreria ben bilanciata di frammenti di circa 0,2-2 kb che rappresentano l'intero genoma. Molti tipi diversi di procedure di analisi a valle sono compatibili con il prodotto Ampli1 WGA PLUS, come la rilevazione di varianti mediante sequenziamento Sanger o di nuova generazione (NGS), l'analisi di genotipizzazione basata su microsatelliti o altri tipi di PCR, la CGH in metafase, la CGH su array e l'analisi del numero di copie a livello genomico mediante NGS. Due kit downstream dedicati, Ampli1 OncoSeek Panel e Ampli1 LowPass Kit per Illumina,