Reagente enzima A018 series

enzima UDGper Rt-qPCRbatteriologico

L'enzima UDG termogenico (uracil-DNA glicosilasi) è stato studiato, estratto e purificato da batteri cresciuti in laboratorio e, analogamente all'UNG di E. coli, idrolizza i legami uracile-glicoside nel DNA a singolo o doppio filamento, elimina l'uracile e produce siti non basati sensibili agli alcali nel DNA. Questi siti privi di basi possono essere idrolizzati dall'endonucleasi degli acidi nucleici, dal riscaldamento o dal trattamento con alcali e, a differenza dell'UNG di E. coli, l'enzima presenta una bassa stabilità termica ed è quindi più probabile la sua inattivazione. A seconda di come viene preparato il DNA, gli enzimi UDG possono essere utilizzati per ottenere una scissione dell'U-DNA comune, sito-specifica o filamento-specifica. Definizione di unità Un'unità è definita come la quantità di uracil-DNA glicosilasi necessaria per degradare completamente 1 μg di uracil-DNA purificato a singolo filamento (M13) in 60 minuti a 37°C.【Caratteristiche del prodotto I siti U-DNA su DNA a singolo e doppio filamento possono essere idrolizzati, i legami glicosidici dell'uracile possono essere eliminati e i siti privi di base sensibili agli alcali possono essere prodotti nel DNA. è attivo sia per il DNA a singolo che a doppio filamento. non è attivo per l'RNA e il DNA naturalmente privi di uracile. non richiede ioni metallici ed è completamente attivo in presenza di EDTA. Tuttavia, l'attività residua in sistemi che superano i 100mM di K+ o Na+ è pari a circa il 70% dell'attività originale e richiede un maggiore utilizzo. la temperatura di reazione ottimale è 37°C, ma l'attività è migliore in un ampio intervallo di 20-50°C, mentre a 95°C può essere completamente inattivato in 2 minuti. la quantità d'uso raccomandata per la PCR è di 0,2U-1U/25μl, mentre la quantità d'uso raccomandata per la RT-qPCR in un solo passaggio e a 55-65°C non è superiore a 0,2U/25 μl,