Kit di reagenti in soluzione 2-D Quant

coloranteper elettroforesiper concentrazione di proteine

il kit 2-D Quant è stato progettato per la determinazione accurata della concentrazione di proteine in campioni preparati per tecniche di elettroforesi come l'elettroforesi 2-D, la SDS-PAGE o la IEF. Determina con precisione la concentrazione proteica in presenza di SDS al 2%, DTT all'1%, urea 8 M, tiourea 2 M, CHAPS al 4%, Pharmalyte al 2% e tampone IPG al 2%. Precipita quantitativamente le proteine lasciando dietro di sé le sostanze interferenti. Risposta lineare nell'intervallo da 0 a 50 μg di proteine, con volumi di campione raccomandati da 1 a 50 μl. I comuni metodi spettrofotometrici di quantificazione delle proteine si basano sul legame con il colorante Coomassie o sulla riduzione catalizzata dalle proteine dello ione rameico (Cu2+) a ione rameoso (Cu+). I saggi che legano il colorante non possono essere utilizzati in presenza di qualsiasi reagente che leghi anche il colorante. Ciò include anfoliti e detergenti di supporto, come il CHAPS PlusOne, l'SDS e il Triton X-100. I dosaggi che dipendono dalla riduzione dello ione rameico non possono essere utilizzati in presenza di riduttori come il DTT o di reagenti che formano complessi con lo ione rameico, come la tiourea o l'EDTA. La procedura del kit Quant 2-D funziona precipitando quantitativamente le proteine e lasciando dietro di sé le sostanze interferenti. Il test si basa sul legame specifico degli ioni rame alle proteine. Le proteine precipitate vengono risospese in una soluzione contenente rame e il rame non legato viene misurato con un agente colorimetrico. L'assorbanza a 480 nm è inversamente correlata alla concentrazione di proteine.