Camera di elettroforesi per PCR EHS1 series

orizzontale

La gamma di dimensioni dei frammenti da separare determina la scelta della concentrazione di agarosio per un gel. La concentrazione tipica di agarosio va dallo 0,5% al 3,0%. Per i frammenti di DNA di grandi dimensioni sono necessari gel a bassa percentuale, mentre per i frammenti di DNA di piccole dimensioni si consigliano gel ad alta percentuale. I gel deboli (agarosio allo 0,5%) devono essere elettroforesi a basse temperature (ad es. -4°C). I gel di agarosio da 0,75% a 1,0%, per l'elettroforesi di routine, sono consigliati per un'ampia gamma di separazioni (da 0,15 a 15 kb). i gel di agarosio al 2...4% sono solitamente scelti per la risoluzione dei frammenti di PCR. Se il gel deve essere successivamente fotografato, i gel sottili (da 2 a 3 mm) con agarosio a bassa percentuale sono migliori di quelli spessi o ad alta percentuale. Questi ultimi producono una maggiore opacità e autofluorescenza. Tampone per elettroforesi Il tampone TAE fornisce una risoluzione ottimale per i frammenti di lunghezza superiore a 4 kb, mentre per i frammenti di lunghezza compresa tra 0,1 e 3 kb si dovrebbe scegliere il tampone TBE. Il TBE ha una maggiore capacità tampone e una minore conduttività rispetto al TAE e pertanto dovrebbe essere utilizzato per l'elettroforesi ad alta tensione. Inoltre, il tampone TBE genera meno calore del TAE a una tensione equivalente e non consente una significativa deriva del pH. Nota: a causa della sua minore capacità tampone, il TAE deve essere fatto circolare o mescolato di tanto in tanto per l'elettroforesi completa, soprattutto a tensioni più elevate. Influenza della temperatura L'elettroforesi ad alta tensione produce calore. Inoltre, i tamponi ad alta conduttività come il TAE generano più calore dei tamponi a bassa conduttività.