Il test CBIACTH è un lumELISA (Chemiluninescence Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) a due siti per la misurazione della catena biologicamente attiva di 39 aminoacidi dell'ACTH. Un anticorpo policlonale di capra contro l'ACTH, purificato mediante cromatografia di affinità, e un anticorpo monoclonale di topo contro l'ACTH sono specifici per regioni ben definite della molecola di ACTH. Un anticorpo è stato preparato per legare solo la C-terminale dell'ACTH 34-39 e questo anticorpo è biotinilato. L'altro anticorpo è preparato per legare solo la regione centrale e N-terminale dell'ACTH 1-24 e questo anticorpo è marcato con perossidasi di rafano [HRP] per la rilevazione. In questo test, i calibratori, i controlli o i campioni sono incubati simultaneamente con l'anticorpo marcato con l'enzima e un anticorpo accoppiato con biotina in un pozzetto della micropiastra rivestito di streptavidina. Al termine dell'incubazione del test, il micropozzetto viene lavato per rimuovere i componenti non legati. Dopo l'aggiunta del substrato luminol, l'attività enzimatica nella frazione legata all'enzima è direttamente proporzionale alla concentrazione di ACTH nel campione. Viene preparata una curva standard che mette in relazione l'unità di luce (RLU) con la concentrazione di ACTH. Le concentrazioni di ACTH presenti nei controlli e nei campioni vengono determinate direttamente da questa curva.
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