La libreria VENUS-fusion di S. cerevisiae consiste in ceppi che esprimono due frammenti (VN o VC) della proteina fluorescente VENUS attaccati al C-terminus di ciascuna proteina. L'interazione tra due proteine può essere analizzata facilmente e rapidamente per tutte le proteine del lievito e l'interazione tra proteine espresse allo stato naturale può essere analizzata utilizzando il proprio promotore nella cellula.
Caratteristiche e vantaggi
Analisi delle interazioni proteiche e della localizzazione intracellulare in cellule vive
Osservazione semplice possibile solo con un microscopio a fluorescenza
Facile studio della funzione e dell'interazione di nuove proteine sconosciute
Possibilità di analisi della proteinilazione (ubiquitinazione, sumoilazione, neddilazione, ecc.)
Panoramica
La libreria di fusione VENUS di S. cerevisiae è stata sviluppata presso la Seoul National University (VN-fusion Library: Genome Res. 2013. 23:736-746 & VC-fusion Library: Genome Res. 2019. 29:135-145). Bioneer possiede la loro licenza commerciale esclusiva. La libreria di fusione VENUS consiste in ceppi di S. cerevisiae che esprimono un ORF contenente ciascun frammento di VENUS (VN e VC) al C-terminus. La proteina di fusione VN/VC è stata inserita nel cromosoma del lievito mediante ricombinazione omologa ed espressa utilizzando il proprio promotore. La libreria VN è composta da 5.809 ceppi e la libreria VC da 5552 ceppi, coprendo oltre il 90% del proteoma di S. cerevisiae. .
Principio
Saggio di complementazione in fluorescenza bimolecolare (BiFC)
Nella tecnica di complementazione bimolecolare a fluorescenza (BiFC), una proteina fluorescente (VENUS) viene suddivisa in frammenti N-terminali (VN) e C-terminali (VC) e quindi attaccata a ciascuna delle due proteine con cui deve interagire ed essere espressa.
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