Reagente DNA polimerasi Titan HotTaq

da ricercaper PCR

La Titan HotTaq DNA Polimerasi (Fig. 1) è una Titan Taq DNA Polimerasi modificata. A temperatura ambiente è inattiva, senza attività polimerasica. La Titan HotTaq DNA Polimerasi viene attivata con un'incubazione di 15 minuti a 95-97°C, impedendo l'estensione di primer non specificamente annealizzati e di primer-dimeri formatisi a basse temperature durante l'impostazione della PCR. L'enzima ha un'attività di sostituzione dell'esonucleasi da 5' a 3' dipendente dalla polimerizzazione, ma non ha un'attività esonucleasica da 3' a 5'. L'enzima ha un'attività di "estendasi" che consente il clonaggio TA. Concentrazione: 5 unità/µl Definizione di unità: Un'unità è definita come la quantità di enzima necessaria a catalizzare l'incorporazione di 10 nmol di dNTP in una forma insolubile in acido in 30 minuti a 74°C. Fonte: Purificato da un ceppo di E. coli portatore di un plasmide iperproduttore contenente un gene modificato della DNA polimerasi di Thermus aquaticus. Controllo di qualità: L'enzima è privo di attività di nicking e priming, esonucleasi ed endonucleasi non specifiche. SDS/PAGE - banda di 95 kD, >98% di purezza. Attività e stabilità testate tramite termociclaggio. Il tasso di errore per nucleotide per ciclo è ~ 2,5 x 10-5; la precisione è ~ 4 x 104. L'emivita stimata a 95°C è di 1,5 ore. Conservazione e tampone di diluizione: 50% glicerolo (v/v), 20 mM Tris-HCl pH 8,7 a 25°C, 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA e stabilizzatori. Fornito con: 10x tampone di reazione 1 (Mg2+, senza detergenti) Tris-HCl e (NH4)2SO4 10x tampone di reazione 2 (senza Mg2+) Tris-HCl, (NH4)2SO4 e detergente 25 mM MgCl2 enhancer 10x - Additivo che facilita l'amplificazione di templates difficili (ad es. templates di DNA ricchi di GC).