Reagente in soluzione Ponceau S

soluzione colorantescala proteicaper western blot

La soluzione di colorazione Ponceaus S è un colorante di membrana pronto all'uso per valutare l'efficienza di trasferimento di un western blot. Questo colorante è consigliato per la colorazione rapida e reversibile delle proteine su membrane di nitrocellulosa o PVDF. La colorazione Ponceau S è reversibile e può essere rimossa con una breve incubazione in NaOH 0,1%. La soluzione di Ponceau S può essere utilizzata per valutare la quantità totale di proteine o l'efficienza di trasferimento su nitrocellulosa e membrana PVDF. La membrana PVDF viene colorata con Ponceau S per 5 minuti e lavata con ddH2O per 3 minuti. Si ottengono bande rosa visibili. Corsia 1, 13: Ladder di proteine precolorate #PM019-0500 Corsia 2-7: diluizioni 2X di ladder di proteine non colorate #PMU12-0500 Corsia 8-12: 2000, 1000, 500, 100, 50 ng di BSA Materiali necessari ma non forniti Contenitore: scatola per la colorazione del gel Agitatore: agitatore orbitale o a dondolo Impostazione della reazione Dopo aver trasferito il gel SDS-PAGE su una membrana di nitrocellulosa o PVDF, collocare la membrana trasferita in un contenitore per la colorazione. Immergere la membrana in una quantità di soluzione colorante per proteine Ponceau S sufficiente a coprire l'intera membrana. Agitare leggermente il contenitore di colorazione per 5-15 minuti a temperatura ambiente. Le bande proteiche saranno colorate e cominceranno a diventare visibili in 5-15 minuti. Lavare via l'eccesso di colorazione sulla membrana con acqua di rete fino a quando le bande proteiche sono chiare. Per l'ulteriore fase di blocco della membrana, rimuovere la soluzione colorante di Ponceau S dalla membrana ponendo la membrana in 20 ml di NaOH allo 0,1% per 1 o 2 minuti, quindi risciacquare in acqua DI per 1 o 2 minuti.