rilevazione qualitativa dell'RNA del virus del 2019 in campioni del tratto respiratorio superiore
(estratti nasofaringei e orofaringei) mediante sistemi di PCR in tempo reale. È considerato un aiuto nella diagnosi dell'infezione da virus 2019.
2. Principio della RT-PCR in tempo reale
Il principio della rilevazione in tempo reale si basa sul saggio fluorogenico della 5'nucleasi. Durante la reazione di PCR, la DNA polimerasi
taglia la sonda all'estremità 5' e separa il colorante reporter dal colorante quencher solo quando la sonda si ibrida con il DNA bersaglio.
Questa scissione dà luogo al segnale fluorescente generato dal colorante reporter scisso, che viene monitorato in tempo reale dal sistema di rilevamento della PCR. Il ciclo di PCR in cui viene rilevato inizialmente un aumento del segnale di fluorescenza (Ct) è proporzionale alla quantità dello specifico prodotto di PCR. Il monitoraggio delle intensità di fluorescenza in tempo reale consente di rilevare il prodotto in accumulo senza dover riaprire la provetta di reazione dopo l'amplificazione.
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